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      文章詳情

      細胞培養——收到細胞的處理方式

      日期:2022-06-27 00:01
      瀏覽次數:251
      摘要:1. 收到細胞株包裹時, 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞 株請盡速開始培養, 或立即冷凍保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。

                                                                         細胞培養——收到細胞的處理方式

                                                                              圣賓儀器科技上海有限公司

             細胞活化︰  
       1. 收到細胞株包裹時, 請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形, 若有請立即通知。細胞  株請盡速開始培養, 或立即冷凍保存(置于–70 °C, 隔夜后, 移到liq N2)。   
      2.冷凍細胞解凍程序:  
      2.1. 依據細胞株數據單指定之基礎培養基種類、血清種類和其它指定之成份和比  例, 制備培養基。絕大多數之細胞均無法立即適應不同之基礎培養基或不同之  血清種類, 若因實驗需要, 必須有所不同時, 務必以緩慢比例漸次改變培養  基組成, 確定細胞適應后, 方進行所需之實驗。 
      2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse  serum, 馬血清),對細胞而言差異極大,請務必依據細胞株資料單指定之血清種  類培養之。 
      2.3. 將培養基置于37 °C 水槽中回溫, 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之, 移入無  菌操作臺內。取出冷凍管, 立即放入37 °C 水槽中快速解凍, 水面高度不可  接近或高過冷凍管之蓋沿, 否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全  部融化后, 以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部, 移入無菌操作臺內。 
      2.4. 依據細胞種類和濃度,于無菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask  中。取出已解凍之細胞懸浮液,緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基, 混  合均勻,放入37 °C,5 % CO2 培養箱培養。
      2.5. 對絕大多數細胞而言,1 % 以下之冷凍保護劑DMSO,不會對細胞之貼附或活  化有不佳影響,不需立刻由解凍細胞中去除, 待di二天確定細胞生長或貼附良  好后再去除即可。惟對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞,需  立即去除DMSO 者, 則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中,  離心300 xg (約1000 rpm),5 分鐘,小心移去上清液,加入適量新鮮培養基,  將細胞均勻混合后, 轉移至培養瓶中, 再放入37 °C, 5 % CO2 培養箱培養。 
      收到T25 flask 細胞時, 處理方式為︰  
      1. 于寄送過程中,為避免起泡造成細胞脫落死亡,T25 flask 均加滿培養基。請檢查  flask 外觀,并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象,若有任何問題, 不  要打開蓋子,請立即通知細胞實驗室。 
      2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C, 5 % CO2 培養箱中,使細胞回溫至37 °C, 并  讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。隔天后,于無菌操作箱內取出flask  內之培養基,(取出之培養基可以再使用),僅留約5-10ml 培養基于flask 內,依  一般培養方式再將細胞置入培養箱中,或細胞已長滿盤, 則將細胞做傳代培養。

                                                                                                                                                                         本篇轉載至實驗之家

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